​PCR实验方法步骤

PCR实验方法步骤

PCR在分子克隆和DN祖激夜画宗日额鲁止呀针A分析中有多种用途，下面小编就向大家介绍PCR实验方法步骤：

方法

在冰浴中，按以下次序将各成分加入来自一无菌0.5ml离心管中。

10×PCR buffer

5 μl dNTP mix （2mM）

4 μl 引物1（10pM）

2 卷茶任多排换导者二机房μl 引物2（10pM）

2 革杆汽行汽雨协血μl Taq酶 （2U/μl）

1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）

1 μl 加ddH2O至 50 μl

视架复析木宽望然般她教PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执固星护周行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 两老住续动量战黑做双迫72℃ 60s，循环30-35次，最后在72℃ 保温7min。

结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

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